空氣中微生物檢測(cè)

一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

本實(shí)驗(yàn)用滅菌后的培養(yǎng)皿在空氣中采樣后并培養(yǎng)一段時(shí)間，測(cè)定空氣中的微生物，其實(shí)驗(yàn)意義在于：

(1)了解空氣中微生物的分布狀況。

 (2)比較普通實(shí)驗(yàn)室和無菌室空氣中存在的微生物的數(shù)量和種類。

 (3)驗(yàn)證無菌操作法在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的重要性。

二、 實(shí)驗(yàn)原理

空氣是人類保持正常活動(dòng)的物質(zhì)條件，并與人類鍵康有著極為密切的關(guān)系，隨著社會(huì)進(jìn)入信息時(shí)代，空氣微生物采樣檢測(cè)也得到了飛速發(fā)展，已研制出快速、敏感、特異，自動(dòng)化程度高的各類儀器，為保持高質(zhì)量的空氣環(huán)境，應(yīng)使用正確先進(jìn)的空氣監(jiān)測(cè)方法。

在我們周圍的環(huán)境中存在著種類繁多、數(shù)量龐大的微生物?？諝庵幸膊焕狻ｋm然空氣不是微生物棲息的良好環(huán)境。但由于氣流、灰塵和水沫的流動(dòng)，人和動(dòng)物的活動(dòng)等原因，仍有相當(dāng)數(shù)量的微生物存在。

空氣中微生物的采集方法很多，主要有用空氣微生物采樣器采樣監(jiān)測(cè)和用自然沉降采樣法進(jìn)行采樣。本文就各類采樣方法的性能做了介紹，使能正確選用各類采樣方法?？諝馕⑸锊蓸又饕婕安蓸悠?、采樣介質(zhì)、采樣方法及檢驗(yàn)程度 4 個(gè)方面。 空氣微生物采樣器主要有：撞擊式采樣器、過濾式空氣采樣器、離心式空氣采樣器、氣旋式采樣器、靜電沉降采樣器等等。

當(dāng)空氣中個(gè)體微小的微生物落到適合于它們生長繁殖的固體培養(yǎng)基的表面時(shí)，在適溫下培養(yǎng)一段時(shí)間后，每一個(gè)分散的菌體或孢子就會(huì)形成一個(gè)個(gè)肉眼可見的細(xì)胞群體即菌落。觀察大小、形態(tài)各異的菌落，就可大致鑒別空氣個(gè)存在的微生物的種類。本實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)普通實(shí)驗(yàn)室和消毒后的無菌室空氣中存在的微生物，從而判斷無菌室的消毒效果，了解空氣中常見的微生物類群。

三、 實(shí)驗(yàn)裝置與儀器

1. 實(shí)驗(yàn)儀器

(1) 無菌平皿，數(shù)量若干套

(2) 酒精燈，數(shù)量×1

(3) 培養(yǎng)箱，數(shù)量×2

(4) 高壓蒸汽滅菌器

(5) 干熱滅菌器

(6) 冰箱

(7) 平皿（直徑9cm）

(8) 量筒

(9) 三角燒瓶

(10) pH計(jì)

2. 實(shí)驗(yàn)所需試劑

(1) 蛋白胨，數(shù)量 10g

(2) 牛肉膏，數(shù)量3g

(3) 氯化鈉 5g

(4) 瓊脂 15-20g

(5) 蒸餾水 1000mL

四、 實(shí)驗(yàn)步驟

1. 瓊脂培養(yǎng)基制作方法：將蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉、瓊脂和蒸餾水混合，加熱溶解，校正pH至7.4，過濾分裝，121oC 20min分鐘高壓滅菌，用自然沉降法測(cè)定時(shí)，傾注約15mL于滅菌平皿內(nèi)，制成營養(yǎng)瓊脂平板。

2. 倒平板：按常法配置上述培養(yǎng)基，分裝于三角瓶中，高壓滅菌備用。臨用前將培養(yǎng)基熔化，冷卻至50℃左右，倒平板若干個(gè)備用。

3. 檢測(cè)：先將無菌室的紫外燈打開，照射15min后關(guān)閉。打開上述冷凝了的無菌平板的皿蓋，讓其在無菌室空間和無人走動(dòng)的普通實(shí)驗(yàn)室空間分別暴露5min或30min后，蓋上皿蓋。要求每種培養(yǎng)基的平板在每個(gè)空間設(shè)3個(gè)重復(fù)。

4. 培養(yǎng)：將細(xì)菌培養(yǎng)基平板和真菌培養(yǎng)基平板分別置37℃和28℃的培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，1—2d后開始連續(xù)觀察，注意不同類別的菌落出現(xiàn)的順序及菌落的大小、形狀、顏色、干濕等的變化。

注意事項(xiàng)：

[1] 設(shè)置采樣點(diǎn)時(shí)，應(yīng)根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)大小，選擇有代表性的位置作為空氣細(xì)菌檢測(cè)的采樣點(diǎn)，通常設(shè)置5個(gè)采樣點(diǎn)，即室內(nèi)墻角對(duì)角線交點(diǎn)為一采樣點(diǎn)，該交點(diǎn)與四墻角連線的中點(diǎn)為另外4個(gè)采樣點(diǎn)。

[2] 采樣的高度通常為1.2-1.5m。

[3] 采樣點(diǎn)應(yīng)遠(yuǎn)離墻壁1m以上，并避開空調(diào)、門窗等空氣流通處。

五、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄

表1 菌落培養(yǎng)結(jié)果小結(jié)

2. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算空氣中菌落總數(shù)

采用平皿沉降法測(cè)定空氣中菌落總數(shù)，計(jì)算公式為
細(xì)菌數(shù)（CFU）/ m³＝N×100/A×5/T×1000/10＝50000N/AT

注：A：平板面積（cm²）；

T：平板暴露時(shí)間（min）；

N：平板平均菌落數(shù)（CFU）；

六、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論

1. 空氣中微生物檢測(cè)的意義是什么？

2. 影響空氣中微生物檢測(cè)結(jié)果的因素有哪些？

3. 如何利用空氣中微生物檢測(cè)結(jié)果來評(píng)價(jià)環(huán)境空氣質(zhì)量？